ПЦР-диагностика

АО Семейный доктор ПЦР-диагностика инфекций

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) – высокочувствительный метод выявления специфических фрагментов ДНК/РНК. Используется в основном в диагностике инфекционных заболеваний, генетике и онкологии. ПЦР позволяет определить практически любых возбудителей в любом биоматериале: крови, моче, соскобах, мазках, мокроте и т.д. Методика обладает высокой точностью, и при этом позволяет получить результаты очень быстро, при необходимости уже через несколько часов после получения материала для исследования.

Общее описание услуги

ПЦР – основной прямой метод этиологической (направленной на выявление возбудителя) диагностики большинства инфекционных заболеваний. Суть метода состоит в том, что в биоматериале, где могут находиться живые или даже погибшие бактерии, вирусы, грибки или простейшие, обнаруживаются специфические для данного микроорганизма фрагменты ДНК. По ним этого возбудителя идентифицируют и даже, если это возможно, оценивают его количество.

Особенности и преимущества ПЦР:

• высокая чувствительность. Можно выявить микроорганизмы, даже если их количество крайне мало. Вплоть до единичных копий ДНК;

• высокая специфичность. Ложноположительные результаты практически исключены, так как метод направлен на поиск участков ДНК, специфичных для конкретного микроорганизма;

• количественный анализ. С помощью ПЦР можно определить не только факт наличия, но и концентрацию возбудителя в биоматериале, что важно, например, для определения вирусной нагрузки при ВИЧ или для оценки роли условно-патогенной микрофлоры в воспалительном процессе: бактерий или грибков, которые в норме могут присутствовать в биоматериале, но вызывают воспаление только при избыточном росте;

• любой биоматериал. Для точности ПЦР нет разницы, где содержится бактерия или вирус. Его ДНК можно искать где угодно: например, в слюне, моче, кале, мокроте, спинномозговой жидкости, мазке (в зависимости от типичной локализации процесса и клинических проявлений);

• быстрые результаты. Особенно важно для диагностики острых инфекционных заболеваний. Лаборатория обычно выдаёт результат уже на следующий день, а в экстренных случаях (например, при тяжелом состоянии пациента) можно получить результаты уже через несколько часов.

Показания

ПЦР может использоваться в диагностике большинства известных науке инфекционных и паразитарных заболеваний, если технически возможно получить биоматериал, потенциально содержащий ДНК или РНК возбудителя. С использованием ПЦР диагностируют респираторные, кишечные, венерические, детские, кожные, парентеральные (передающиеся через кровь) и любые другие инфекции. Метод используется как для первичной диагностики, так и для контроля динамики и терапии.

Возможные показания к применению ПЦР

• Наличие лихорадки, кашля, боли в горле, сыпи, диареи, выделений из половых органов или других симптомов, указывающих на вероятный инфекционный процесс (если требуется выявление возбудителя).

• Уточнение возбудителя в случае неудачной эмпирической этиотропной терапии (если назначение стандартной схемы лечения не привело к успеху, то требуется уточнение возбудителя для более точного подбора терапии).

• Скрининг бессимптомных инфекционных заболеваний (например, скрининг половых инфекций при подготовке к беременности или анализ на ВПЧ высокого онкогенного риска в рамках скрининга рака шейки матки).

• Обследование контактных лиц (эпидемиологические показания), например, в очагах вспышек инфекционных заболеваний.

• Контроль излеченности: ПЦР может проводиться через 4-6 недель после завершения терапии, если необходимо подтвердить полную элиминацию возбудителя.

• Мониторинг клинического течения, принятие решения о начале или прекращении терапии (например, оценка вирусной нагрузки при ВИЧ, вирусных гепатитах).

Таким образом, ПЦР – один из основных и наиболее востребованных методов выявления, исключения и мониторинга инфекционных заболеваний, который применяется практически во всех областях медицины.

Как проходит

Для пациента ПЦР диагностика выглядит как сдача биоматериала на анализ. Например, это может быть:

• забор крови из локтевой вены;

• сдача урогенитальных мазков, соскобов;

• мазок-отпечаток с поверхности высыпаний на коже, раневое отделяемое;

• мазок из носа, зева (например, в диагностике COVID-19 или гриппа);

• сдача мочи, эякулята, секрета предстательной железы.

Материал может быть собран в клинике, в том числе при участии медперсонала, или собирается пациентом самостоятельно в стерильный контейнер и впоследствии доставляется в лабораторию. При этом важно избежать контаминации (загрязнения) биоматериала, чтобы не получить ложноположительные результаты, так как ПЦР обладает высокой чувствительностью и может обнаружить в материале даже единичные «чужие» бактериальные клетки или вирусные частицы.

В лаборатории классическая ПЦР проводится в три этапа:

1. Пробоподготовка. Извлечение ДНК из биоматериала, удаление посторонних примесей. Классический метод экстракции ДНК называется фенол-хлороформной экстракцией (phenol-chloroform extraction). В современных клинических лабораториях вместо него применяются наборы на магнитных микрочастицах или силикатных колонках. 

2. Амплификация. Это многократное увеличение количества копий определенного фрагмента ДНК или РНК (ампликонов). Целевой участок можно размножить в миллионы или даже в миллиарды раз. Процедура предполагает 30-50 циклов денатурации, гибридизации и удлинения цепей. Для РНК требуется ещё один дополнительный шаг: обратная транскрипция.

3. Детекция. Раньше для качественного (но не количественного) определения ДНК применяли электрофорез с разделением ампликонов в агарозном геле и последующей ультрафиолетовой детекцией. Сегодня чаще используется детекция в реальном времени (Real-Time PCR). В этом случае этап фактически объединён с предыдущим (амплификацией). Суть метода: в реакционную смесь добавляют специальные флуоресцентные метки (красители или зонды), которые начинают светиться только тогда, когда связываются с новыми ампликонами. Пробирки сканируются лазером и светодиодами с измерением уровня свечения CCD-камерами или фотодиодными матрицами. Компьютер строит графики и выдаёт числовые данные. Можно оценивать не только наличие, но и количество копий ДНК.

Результаты

Результаты могут быть качественными или количественными.

Чаще всего ПЦР проводится с целью выявления или исключения наличия возбудителя. В таком случае результат может быть только положительным (есть ДНК возбудителя) или отрицательным (возбудитель в биоматериале отсутствует).

Реже выдаются количественные результаты: определяется количество копий ДНК в объеме биоматериала. Результаты интерпретируются врачом и часто влияют на терапевтическую тактику хронического инфекционного заболевания.

Важные моменты

Какой врач может направить пациента на ПЦР

Пациента может направить на ПЦР любой врач, так как в большинстве областей медицины встречаются инфекционные заболевания. Чаще всего ПЦР используют в дерматовенерологии, гинекологии, урологии, отоларингологии, пульмонологии.

Области применения ПЦР в онкологии и генетике

В онкологии ПЦР используется для выявления мутаций в раковых клетках, которые могли бы сделать их мишенями для определённых препаратов, например, для таргетной терапии

Также оценивается уровень экспрессии определенных генов в опухолевой ткани, что может быть важно для оценки степени злокачественности опухоли.

При лейкозах и лимфомах ПЦР применяют для выявления минимальной остаточной болезни.

В генетике ПЦР применяется в диагностике наследственных заболеваний: например, муковисцидоз, спинальная мышечная атрофия и другие.

ПЦР применяют для оценки предрасположенности к заболеваниям и чувствительности к лекарствам, часто в рамках услуги «генетический паспорт».

Бывают ли ошибочные результаты ПЦР

ПЦР обладает высокой точностью. Как ложноположительные, так и ложноотрицательные результаты встречаются крайне редко. В большинстве случаев проблемы возникают не в процессе проведения ПЦР, а на этапе сбора биоматериала.

Ложноположительные результаты – это выявление бактерий или вирусов, которых на самом деле нет. Так бывает, если биоматериал загрязнен. Изредка выявляются похожие участки ДНК, если патоген сильно похож генетически на условно-патогенный микроорганизм: например, возбудитель туберкулеза и нетуберкулезные микобактерии.

Ложноотрицательные результаты – это ситуация, когда инфекция есть, но она не выявлена. С высокой вероятностью проблема связана с неудачным забором биоматериала, когда возбудитель не попал в образец: например, если мазок из носа взяли недостаточно глубоко или же внутриклеточных возбудителей пытаются найти в биоматериале, в котором почти нет клеток.

Где сдать анализ ПЦР

Для сдачи анализов на инфекционные заболевания обратитесь в клинику «Семейный доктор». Наши преимущества:

• опытный медперсонал тщательно соблюдает технику забора биоматериала, что обеспечивает высокую точность диагностики;

• мы идеально соблюдаем правила транспортировки и хранения биоматериала, что исключает его загрязнение или повреждение;

• у нас доступны практически все востребованные исследования ПЦР, как на отдельных возбудителей, так и комплексные панели (обследование сразу на несколько инфекций в одном образце: например, на ИППП или респираторные вирусы);

• применяются как качественные (наличие возбудителя), так и количественные исследования (концентрация возбудителя, вирусная нагрузка);

• быстрые результаты, которые при необходимости можно получить даже в день сдачи биоматериала (при этом цена исследования может быть выше).

После проведения ПЦР вы можете получить в наших клиниках консультацию врача любой специализации, который оценит результаты и при необходимости назначит лечение.